Bouin‘s組織固定液配製和使用方法

組織固定是製片技術的重要環節,固定是否徹底,影響以後的各個製片過程。如固定不好,就無法制出一張理想的組織玻片標本。因子,在製片過程中,選擇一款效果好的固定液,將組織及時固定好是一個關鍵的步驟。

組織固定的目的

固定的目的在於儲存細胞和組織的原有形態結構,固定劑能阻止內源性溶酶體酶對自身組織和細胞的自溶、抑制細菌和黴菌的生長。固定劑透過凝固、生成新增化合物等使蛋白質內部結構發生改變,從而使酶失活。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等,較常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。

Bouin's組織固定原理

Bouin‘s組織固定液成分中,苦味酸可沉澱蛋白引起組織收縮,但不會使組織硬化,其與甲醛和冰醋酸混合後,穿透速度快,固定均勻,組織收縮輕微,對細胞的微細結構顯示的很清晰,為一種良好的固定液。尤其對Masson三色法等的結締組織和肌纖維染色有媒染作用,經其固定後的組織著色鮮豔。該固定液也可能軟化面板和肌腱,以利於切片。

Bouin's固定液配製

(以100ml為例)

苦味酸飽和水溶液75ml,甲醛液25ml,冰醋酸5ml

Bouin‘s組織固定液配製和使用方法

Bouins固定液圖片

Bouin's固定液用途

適用於組織固定,特別適用於Masson三色染色的組織固定以及結締組織和肌纖維染色前的媒染

Bouin's固定使用方法

容器要足夠大,使用廣口瓶為宜,先放固定液再放標本,避免組織與容器底部貼上。

固定液用量建議是標本的5倍。

一般僅需固定30~60min。如果組織塊大,可適當延長固定時間,但不宜超過24h。

用Bouin’s固定液固定後,組織可稍微流水沖洗或不沖洗直接轉入70%的乙醇脫水,經乙醇脫水時可除去大部分PA,組織留有一點黃色,對染色也無影響。

固定結果表現

固定良好:組織表面和切面為黃色,經長時間水洗可去掉黃色而呈灰白色,不帶有血色;組織具有彈性且質感較硬。

固定不亮:組織切面見血色,含液體較多,組織仍呈柔軟狀態。

Bouin‘s組織固定液配製和使用方法

人腎組織Masson

注意事項

1、Bouin‘s固定液對人體有一定的損害,請在通風好的環境下小心操作,避免吸入。

2、組織取材的厚度不同,固定時間也不同,對組織恰當的選材有利於固定液的滲透。常規活檢組織比較適合的厚度為2~4mm,一般不超過6mm。

3、固定液的容量應足夠,一般固定液與組織塊的體積比率應大於10:1。如果容積不夠大,可以在固定期間更換1~3次固定液。

4、溫度對固定的影響很明顯,提高溫度可以加速固定作用,但溫度不宜過高。

5、如果實驗室接收到的組織標本中的固定液不足,應立即補充固定液固定。

6、取出新鮮組織後,應及時固定,無法及時固定時,應保存於生理鹽水中及時送檢。

7、防止細胞的自溶,標本應被固定液完全淹蓋,如浮起的標本應用含有固定液的紗布覆蓋。

頂部