透過微型凝膠電泳提供快速、便捷的RNA定量方法,分析其物理狀態

溴化乙錠是一種嵌入試劑,當暴露在紫外線(546nm)下時,發橙色熒光( 發射波長為590nm),當結合核酸後熒光增強20倍。使用溴化乙錠定量RNA通常有兩種方式。

在第一種方法中, 測試樣品可以“點樣”(spotted)到包含溴化乙錠的瓊脂糖凝膠上,然後熒光與已知RNA濃度的一組樣品進行比較,該組樣品點在測試樣品旁邊。

另外一種方法中,樣品可在瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠上電泳(見方案10和11),染色條帶熒光強度與已知的樣品相比較。溴化乙錠的靈敏度極限為200ng/mL 。

透過微型凝膠電泳提供快速、便捷的RNA定量方法,分析其物理狀態

瓊脂糖平板法RNA樣品中可能存在汙染物,可以發熒光或猝滅熒光。為了避免這些問題,RNA樣品和標準品點在含有溴化乙錠(0。5μg/mL)的1%瓊脂糖平板凝膠的表面上。將凝膠在室溫放置幾個小時,以使小分子汙染物有機會散開。

使用短波長紫外光照射澳化乙錠拍攝這些點(photograph the spot)。透過對比標準品的熒光強度估算樣品中的RNA濃度。透過微型凝膠電泳(見第2章)提供快速、便捷的RNA定量方法,並可同時分析其物理狀態。

透過微型凝膠電泳提供快速、便捷的RNA定量方法,分析其物理狀態

1。 2μL RNA樣品與0。4μL凝膠上樣緩衝液IV (僅含溴酚藍) (見附錄1配方)混合,製備含溴化乙錠(0。5μg/mL) 得0。8%瓊脂糖微型膠體,將該混合物加至上樣孔。

2。 一系列標準RNA溶液(0、 2。5μg/mL、5μg/mL、 10μg/mL、 20μg/mL、 30μg/mL、40μg/mL和50μg/mL)各2μL,與0。4μL的凝膠上樣緩衝液IV混合。將這些樣品加至凝膠上樣孔。

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